Elementy enzymologii i biochemii białek - 02 Kinetyka reakcji enzymatycznej katalizowanej przez 1,2-dioksygenazę katecholową

• Kategorie:
  1. Ebooki i Audiobooki »
  2. Pedagogika, edukacja
  1. Ebooki i Audiobooki »
  2. Nauki o zdrowiu »
  3. Biochemia, biofizyka, genetyka
  1. Ebooki i Audiobooki »
  2. Nauki o zdrowiu »
  3. Biologia, botanika, zoologia
  1. Ebooki i Audiobooki »
  2. Nauki o zdrowiu »
  3. Chemia
• Język wydania: polski
• ISBN: 978-83-8012-446-2
• Sposób dostarczenia produktu elektronicznego
  Produkty elektroniczne takie jak Ebooki czy Audiobooki są udostępniane online po uprzednim opłaceniu (PayU, BLIK) na stronie Twoje konto > Biblioteka.

  Pliki można pobrać zazwyczaj w ciągu kilku-kilkunastu minut po uzyskaniu poprawnej autoryzacji płatności, choć w przypadku niektórych publikacji elektronicznych czas oczekiwania może być nieco dłuższy.

  Sprzedaż terytorialna towarów elektronicznych jest regulowana wyłącznie ograniczeniami terytorialnymi licencji konkretnych produktów.
• Ważne informacje techniczne
• Minimalne wymagania sprzętowe:
  • procesor: architektura x86 1GHz lub odpowiedniki w pozostałych architekturach
  • Pamięć operacyjna: 512MB
  • Monitor i karta graficzna: zgodny ze standardem XGA, minimalna rozdzielczość 1024x768 16bit
  • Dysk twardy: dowolny obsługujący system operacyjny z minimalnie 100MB wolnego miejsca
  • Mysz lub inny manipulator + klawiatura
  • Karta sieciowa/modem: umożliwiająca dostęp do sieci Internet z prędkością 512kb/s
• Minimalne wymagania oprogramowania:
  • System Operacyjny: System MS Windows 95 i wyżej, Linux z X.ORG, MacOS 9 lub wyżej, najnowsze systemy mobilne: Android, iPhone, SymbianOS, Windows Mobile
  • Przeglądarka internetowa: Internet Explorer 7 lub wyżej, Opera 9 i wyżej, FireFox 2 i wyżej, Chrome 1.0 i wyżej, Safari 5
  • Przeglądarka z obsługą ciasteczek i włączoną obsługą JavaScript
  • Zalecany plugin Flash Player w wersji 10.0 lub wyżej.
• Informacja o formatach plików:
  • PDF - format polecany do czytania na laptopach oraz komputerach stacjonarnych.
  • EPUB - format pliku, który umożliwia czytanie książek elektronicznych na urządzeniach z mniejszymi ekranami (np. e-czytnik lub smartfon), dając możliwość dopasowania tekstu do wielkości urządzenia i preferencji użytkownika.
  • MOBI - format zapisu firmy Mobipocket, który można pobrać na dowolne urządzenie elektroniczne (np.e-czytnik Kindle) z zainstalowanym programem (np. MobiPocket Reader) pozwalającym czytać pliki MOBI.
  • Audiobooki w formacie MP3 - format pliku, przeznaczony do odsłuchu nagrań audio.
• Rodzaje zabezpieczeń plików:
  • Watermark - (znak wodny) to zaszyfrowana informacja o użytkowniku, który zakupił produkt. Dzięki temu łatwo jest zidentyfikować użytkownika, który rozpowszechnił produkt w sposób niezgodny z prawem.
  • Brak zabezpieczenia - część oferowanych w naszym sklepie plików nie posiada zabezpieczeń. Zazwyczaj tego typu pliki można pobierać ograniczoną ilość razy, określaną przez dostawcę publikacji elektronicznych. W przypadku zbyt dużej ilości pobrań plików na stronie WWW pojawia się stosowny komunikat.

  Więcej informacji o publikacjach elektronicznych

Spis treści

Przedmowa / 9
Wykaz stosowanych oznaczeń / 11
Zasady bezpieczeństwa i higieny pracy obowiązujące w Pracowni biochemii białek / 13

1. Izolacja i oczyszczanie enzymu / 15
1.1. Izolacja i wstępne oczyszczanie 1,2-dioksygenazy katecholowej / 15
1.1.1. WPROWADZENIE / 15
1.1.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI / 18
1.1.3. WYKONANIE / 19
1.1.3.1. Izolacja i wstępne oczyszczanie 1,2-dioksygenazy katecholowej szczepu Stenotrophomonas maltophilia KB2 / 19
1.1.3.2. Oznaczanie aktywności 1,2-dioksygenazy katecholowej / 21
1.1.3.3. Oznaczanie stężenia białka metodą Bradforda / 22
1.1.3.3.1. Przygotowanie krzywej wzorcowej / 22
1.1.3.3.2. Oznaczenie stężenia białka w badanym materiale biologicznym / 23
1.1.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIKÓW / 23
1.2. Wyznaczanie mas cząsteczkowych białek metodą sączenia żelowego oraz oczyszczanie białek metodą chromatografii jonowymiennej / 24
1.2.1. WPROWADZENIE / 24
1.2.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI / 25
1.2.3. WYKONANIE / 26
1.2.3.1. Wyznaczenie masy cząsteczkowej 1,2-dioksygenazy katecholowej metodą sączenia żelowego / 26
1.2.3.2. Oczyszczanie 1,2-dioksygenazy katecholowej metodą chromatografii jonowymiennej / 28
1.2.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIKÓW / 29
1.3. Elektroforeza dwuwymiarowa 2-DE białek / 30
1.3.1. WPROWADZENIE / 30
1.3.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI / 32
1.3.3. WYKONANIE / 32
1.3.3.1. Przygotowanie surowej frakcji enzymatycznej do elektroforezy 2-DE / 32
1.3.3.2. Przygotowanie krzywej wzorcowej do oznaczania stężenia białka metodą Bradforda w obecności buforu do przygotowywania próbek 2-DE / 33
1.3.3.3. Rehydratacja pasków IPG / 34
1.3.3.4. Izoogniskowanie białek z zastosowaniem pasków IPG / 34
1.3.3.5. Przygotowanie pasków do drugiego kierunku SDS-PAGE i rozdział elektroforetyczny / 35
1.3.3.6. Detekcja białek w żelu poliakrylamidowym metodą z Coomassie Brillant Blue / 36
1.3.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIKÓW / 36
1.4. Elektroforeza białek w żelu poliakrylamidowym w warunkach denaturujących / 36
1.4.1. WPROWADZENIE / 36
1.4.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI / 38
1.4.3. WYKONANIE / 38
1.4.3.1. Przygotowanie żelu poliakrylamidowego i rozdział białek / 38
1.4.3.2. Detekcja białek w żelu poliakrylamidowym metodą z Coomassie Brillant Blue oraz metodą srebrową / 39
1.4.4. OPRACOWANIE I DOKUMNETACJA WYNIKÓW / 40
1.5. Literatura / 40

2. Kinetyka reakcji enzymatycznej katalizowanej przez 1,2-dioksygenazę katecholową / 43
2.1. Wyznaczanie optymalnych warunków reakcji enzymatycznej / 43
2.1.1. WPROWADZENIE / 43
2.1.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI / 44
2.1.3. WYKONANIE / 45
2.1.3.1. Badanie wpływu temperatury na aktywność 1,2-dioksygenazy katecholowej / 45
2.1.3.2. Badanie wpływu pH na aktywność 1,2-dioksygenazy katecholowej / 46
2.1.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIKÓW / 47
2.2. Wyznaczanie stałych kinetycznych reakcji enzymatycznej / 48
2.2.1. WPROWADZENIE / 48
2.2.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI / 51
2.2.3. WYKONANIE / 52
2.2.3.1. Badanie wpływu stężenia substratu na aktywność 1,2-dioksygenazy katecholowej / 52
2.2.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIKÓW / 53
2.3. Inhibicja reakcji enzymatycznych / 54
2.3.1. WPROWADZENIE / 54
2.3.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI / 55
2.3.3. WYKONANIE / 56
2.3.3.1. Badanie wpływu 2,4-dichlorofenolu na aktywność 1,2-dioksygenazy katecholowej / 56
2.3.3.2. Badanie wpływu jonów niklu na aktywność 1,2-dioksygenazy katecholowej / 57
2.3.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIKÓW / 58
2.4. Literatura / 59

3. Immobilizacja 1,2-dioksygenazy katecholowej / 61
3.1. Wpływ immobilizacji na aktywność 1,2-dioksygenazy katecholowej / 61
3.1.1. WPROWADZENIE / 61
3.1.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI / 62
3.1.3. WYKONANIE / 63
3.1.3.1. Immobilizacja 1,2-dioksygenazy katecholowej / 63
3.1.3.2. Oznaczanie stężenia białka w kulkach alginianowych / 63
3.1.3.2.1. Wyznaczenie krzywej kalibracyjnej dla oznaczania stężenia białka metodą Bradforda
w obecności KOH / 63
3.1.3.2.2. Oznaczanie stężenia białkach w kulkach alginianowych metodą Bradforda w obecności
KOH / 64
3.1.3.3. Oznaczanie aktywności immobilizowanej 1,2-dioksygenazy katecholowej / 64
3.1.3.4. Wpływ czasu przechowywania na aktywność wolnego i immobilizowanego enzymu / 65
3.1.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIKÓW / 66
3.2. Badanie właściwości immobilizowanego enzymu / 67
3.2.1. WPROWADZENIE / 67
3.2.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI / 68
3.2.3. WYKONANIE / 69
3.2.3.1. Badanie wpływu pH na aktywność wolnej i immobilizowanej 1,2-dioksygenazy katecholowej / 69
3.2.3.2. Badanie wpływu temperatury na aktywność wolnej i immobilizowanej 1,2-dioksygenazy katecholowej / 70
3.2.3.3. Badanie wpływu jonów metali oraz związków fenolowych na aktywność wolnej i immobilizowanej 1,2-dioksygenazy katecholowej / 71
3.2.3.4. Oznaczanie stężenia białka w surowej frakcji enzymatycznej i w kulkach alginianowych / 72
3.2.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIKÓW / 73
3.3. Literatura / 74